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10x genomics单细胞免疫组库

技术线路

    10x genomics单细胞免疫组库测序技术是利用微流体交叉系统将含Barcoded RT Primers的Gel Beads、细胞和酶的混合物、油三者结合形成GEMs,在GEMs中,凝胶珠自动溶解释放大量barcode序列,同时每个细胞裂解释放出mRNA,mRNA再逆转录产生带有10x barcode和UMI信息的cDNA。标记后的cDNA被分成2份,一份使用针对TCR/BCR的C区巢式引物扩增,从而富集T细胞或B细胞,获得TCR/BCR全长VDJ序列,另一份直接构建基因表达的文库,获取5’端基因表达的数据。最后使用Illumina测序平台对文库进行测序检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达和免疫组库数据,从而实现在单细胞水平进行免疫组库测序的目的。该技术将免疫组库测序和转录组测序结合起来,可观察在不同的细胞亚群里面免疫组库多样性的情况。

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    10x genomics单细胞免疫组库测序技术是利用微流体交叉系统将含Barcoded RT Primers的Gel Beads、细胞和酶的混合物、油三者结合形成GEMs,在GEMs中,凝胶珠自动溶解释放大量barcode序列,同时每个细胞裂解释放出mRNA,mRNA再逆转录产生带有10x barcode和UMI信息的cDNA。标记后的cDNA被分成2份,一份使用针对TCR/BCR的C区巢式引物扩增,从而富集T细胞或B细胞,获得TCR/BCR全长VDJ序列,另一份直接构建基因表达的文库,获取5’端基因表达的数据。最后使用Illumina测序平台对文库进行测序检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达和免疫组库数据,从而实现在单细胞水平进行免疫组库测序的目的。该技术将免疫组库测序和转录组测序结合起来,可观察在不同的细胞亚群里面免疫组库多样性的情况。

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